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DESARROLLO DE UN ENSAYO POR MINISECUENCIACIóN DE OCHO SNP ASOCIADOS A PRODUCCIóN LáCTEA
DEVELOPMENT OF AN EIGHT-PLEX SNP ASSAY ASSOCIATED WITH MILK PRODUCTION

Acosta, A.C.1*, Sanz, A.2, Uffo, O.1, Ronda, R.1, Osta, R.2, Martin, I.2, Rodellar, C.2 y Zaragoza, P.2

1Laboratorio de Genética Molecular. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria. San José de las Lajas. La Habana. Cuba. *atzel@censa.edu.cu
2Laboratorio de Genética y Bioquímica. Facultad de Veterinaria. Universidad de Zaragoza. Zaragoza. España.

Palabras clave adicionales
Proteínas lácteas. Selección asistida por marcadores. Hormona del crecimiento y prolactina.
 
Additional keywords
Milk protein. Marker assisted selection. Growth hormone and prolactin.
 
Resumen
Los altos niveles de producción alcanzados en la explotación animal se deben en gran medida al trabajo de selección que se ha desarrollado en las principales especies de interés económico. El empleo de la información molecular en los programas de selección asistida ha abierto un amplio campo en la mejora animal. Se describe la metodología empleada para el genotipado simultáneo de los genes que codifican para las seis principales proteínas lácteas, la hormona del crecimiento y prolactina bovinas. Fueron utilizadas tres técnicas para el genotipado: digestión con enzimas de restricción, secuenciación y minisecuenciación para determinar SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms), donde las dos primeras se usaron como control de los resultados obtenidos por minisecuenciación. Esta última metodología permite la automatización del análisis, el trabajo simultáneo con varias muestras y 10 o más marcadores en una sola reacción. Se observó que los genes que codifican para as2-caseína y prolactina se comportaron monomórficos. Para la as1-caseína se identificaron los alelos B y C; en la b-caseína se identificaron los alelos A y B; por otra parte para la k-caseína fueron los alelos A y B los observados. En la a-lactoalbúmina y b-lactoglobulina se identificaron los alelos A y B, mientras que para la hormona del crecimiento se observaron los alelos L y V. En todos los casos resultaron ser los alelos que con mayor frecuencia se describen. Se corroboró que la técnica de minisecuenciación simplifica el análisis y es útil en la caracterización molecular dirigida a una futura selección asistida por marcadores.
 
Summary
High production levels achieved in animal exploitation is due largely to the selection work that has developed in the main species of economic interest. The use of the molecular information in the programs of assisted selection has opened a big field in the animal improvement. The methodology for the simultaneous genoptyping of the genes that encode the six major milk proteins, growth hormone and bovine prolactin is described. Three techniques were used for genotyping: restriction enzyme digestion, sequencing and minisequencing to determine SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms), where the first two were used as control to the results of minisequencing. This latter methodology enables the automation of analysis, simultaneous work with several samples and ten or more markers in a single reaction. It was found that the genes encoding for as2-casein and prolactin behaved as monomorphic. For the as1-casein the alleles B and C were identified; in the b-casein the alleles A and B were identified; on the other hand for the k-casein the alleles A and B were the observed ones. In the a-lactoalbumin and b-lactoglobulin the alleles A and B were identified, moreover for the growth hormone, alleles L and V were observed. In all cases the most frequent alleles are the described ones. It was confirmed that the minisequencing technique simplifies the analysis and it is useful for the molecular characterization focused a future targeted molecular marker-assisted selection.
 
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