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93 (Mar) pp 1-108
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VARIACIÓN INDIVIDUAL EN LA SUSCEPTIBILIDAD DEL SEMEN PORCINO AL CONGELADO-DESCONGELADO
INTER-INDIVIDUAL BOAR SPERM SUSCEPTIBILITY TO FREEZING-THAWING PROTOCOLS

Medrano, A.1, W.V. Holt1,

1, Institute of Zoology. The Zoological Society of London. Regent"s Park. London NW1 4RY. Reino Unido.

Palabras clave adicionales
Criomicroscopía. Tinciones fluorescentes. Pellets. Análisis por clusters.
 
Additional keywords
Cryomicroscopy. Fluorescent probes. Pellet freezing. Cluster Analysis.
 
Resumen
En este trabajo se estudió la variabilidad en la supervivencia del semen porcino de diferentes individuos al congelado-descongelado. En primer lugar, se empleó un sistema estandarizado de congelación ( pellets en CO2) para comprobar la existencia de individuos cuyo semen es relativamente resistente (llamados good frezers) o muy susceptible ( bad freezers) al proceso de congelación-descongelación. En segundo lugar, se evaluó el efecto de la tasa de congelación en la criosobrevivencia espermática entre individuos y entre eyaculados, por medio de criomicroscopía. Los resultados indican que la susceptibilidad entre individuos parece ser más importante que la tasa de congelación en la criosobrevivencia espermática. Se observó además, por medio de criomicroscopía con tinciones fluorescentes, que la membrana plasmática del espermatozoide se mantiene intacta durante el congelado pero al descongelado se manifiesta la ruptura de esta estructura. Diferencias en la composición química de la membrana espermática podrían explicar la variabilidad individual al congelado-descongelado.
 
Summary
Pig sperm cryopreservation is still not used routinely because of the sensitivity of pig spermatozoa to cold shock, and because cryosurvival is affected by between individual variation. Individual variation has been recognised by the farm industry in the sense that males are classified aseither good or bad freezers. This is an interesting aspect of cryobiology which provides a model to study the source of that variation. To address that issue a series of experiments was undertaken. In order to identify good and bad freezers, spermatozoa from 16 boars housed at an A.I centre were frozen using a standard technique. Spermatozoa from four boars had higher post-thawing values of motility and membrane integrity than the rest. In the next experiment three cooling rates (15, 30, 60°C/min) from -5°C to -50°C were tested on the sperm survival of ten ejaculates from five boars. Fluorescent probes, as membrane integrity reporters, were employed in combination with cryomicroscopy to detect the critical steps of the process. This approach allows observation of the spermatozoa during the freeze-thawing process and estimation of the proportion suffering membrane damage, and the moment when it happens. Two groups of samples were identified by Cluster Analysis: (1) resistents and (2) susceptibles, irrespective of cooling rate. Also, it was observed that, during freezing membrane integrity was maintained but at rewarming damage was manifested. In future experiments thermal properties of the sperm membranes from individuals regarded as good and bad freezers will be analyzed employing plasma membrane markers.
 
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