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164 (Dec) pp 305-403
163 (Sep) pp 201-302
162 (Jun) pp 105-195
161 (Mar) pp 3-102
160 (Dec) pp 401-508
159 (Dec) pp 301-396
158 (Sep) pp 203-300
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154 (Sep) pp 303-603
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151 (Mar) pp 1-100
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93 (Mar) pp 1-108
41 (Mar) pp 1-100
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EFECTOS DE LA COMPOSICIÓN Y RENOVACIÓN PARCIAL DEL MEDIO DE CULTIVO SOBRE EL DESARROLLO DE LOS EMBRIONES BOVINOS PRODUCIDOS IN VITRO
EFFECTS OF MEDIUM COMPOSITION AND ITS PARTIAL RENEWING ON THE DEVELOPMENT OF BOVINE EMBRYOS PRODUCED IN VITRO

Barrio, M.1, A.I. Peña2, L.A. Quintela2, J.J. Becerra2, P.G. Herradón2,

1, Departamento de Patología Animal. Unidad de Reproducción y Obstetricia. Facultad de Veterinaria. Universidad de Santiago de Compostela. 27002 Lugo. España. E-mail: mbarrio@lugo.usc.es
2, Departamento de Patología Animal. Unidad de Reproducción y Obstetricia. Facultad de Veterinaria. Universidad de Santiago de Compostela. 27002 Lugo. España.

Palabras clave adicionales
Embriones bovinos. Fecundación in vitro. Insulina. Transferrina. Selenio.
 
Additional keywords
Bovine embryos. In vitro fecundation insulin. Transferrin. Selenium.
 
Resumen
Los objetivos de este estudio han sido: a) por un lado evaluar la eficiencia del medio de cultivo semi-definido para el desarrollo de los embriones bovinos hasta el estado de blastocisto, Upgraded B2 suplementado con insulina, transferrina y selenito sódico (ITS), frente al cultivo de los mismos en un medio no definido, Upgraded B2 suplementado con suero fetal bovino y células del epitelio oviductal bovino (FCS+BOEC); y b) evaluar el efecto de la renovación parcial del medio de cultivo (suplementado con ITS o FBS+BOEC) añadiendo 20µL de medio fresco cada 48 horas (h) en relación a la no suplementación a lo largo del período de cultivo (10 días). Para evaluar el efecto del medio se procedió al recuento de zigotos que se segmentaron 48 h post inseminación (p.i.), la proporción de blastocistos obtenidos en días 7 y 8 de cultivo, el número de células por blastocisto así como el porcentaje de embriones que eclosionaron hasta el día 10 de desarrollo. El porcentaje de zigotos que se dividen 48 h p.i. fue significativamente superior cuando el medio estaba suplementado con ITS que en presencia de FBS+BOEC. La suplementación con medio fresco durante el período de crecimiento de los embriones ejerce distintas acciones en función del medio utilizado: cuando el medio B2 esta suplementado con ITS, tanto la tasa de blastocistos obtenidos como el número de células por blastocisto han sido significativamente superiores (p<0,05) si no se añade medio fresco cada 48 h. Por el contrario, cuando los embriones se desarrollan en presencia de FBS+BOEC, el porcentaje de embriones que se desarrollan en día 7 de cultivo es superior (p<0,05) si se suplementa con medio fresco en intervalos de 48 h. Se puede concluir entonces que el medio B2 suplementado con ITS sin renovación durante el período de cultivo, puede ser tan eficiente para la producción de embriones bovinos in vitro como el medio suplementado con suero y células.
 
Summary
The aims of the present study were: a) to evaluate the efficiency of a chemically semidefined media [Upgraded B2 medium with insulin, transferrin and sodium selenite (ITS)] for culturing of bovine zygotes up to the blastocysts stage, by comparing it with chemically undefined medium [Upgraded B2 medium containing Fetal Bovine Serum and coculture with Bovine Oviductal Cells (FBS+BOEC)] and b) to evaluate the effect of partially renewing the culture media (ITS or FBS+BOEC) by adding 20 µL of fresh medium every 48 h, or maintaining it unaltered during the whole incubation period (10 days). The efficiency of the different culture systems was determined by the proportions of embryos that cleaved at 48 h post insemination (p.i.), the proportions of blatocysts obtained on days 7 and 8 p.i., the total number of cells per blastocysts and the proportions of hatched blastocysts obtained on day 10 p.i.. The zygote cleavage rate at 48 h p.i. was significantly higher when using the ITS- than the FBS+BOEC- supplemented medium. Adding fresh media during incubation exerted different effects according to the medium used: when using ITS, the total rate of blastocysts per oocyte and the total number of cells per blastocysts were significantly (p<0.05) improved if the culture medium was not partially renewed. In contrast, when using FBS+BOEC, the day 7 blastocysts rate was significantly (p<0.05) improved if was partially renewed at 48 h-intervals. It was concluded that the ITS medium, if not being renewed during incubation, may be as efficient for in vitro production (IVP) of bovine embryos as a chemically undefined medium such as FBS+ BOEC.
 
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