Nuevo
método LC-MS/MS para la identificación y cuantificación
de proteínas en mezclas complejas, LC-MALDI-TOF/TOF.
La Unidad de Proteómica del SCAI ha diseñado
y puesto a punto el uso del LC-MALDI-TOF-TOF como herramienta
alternativa de identificación y cuantificación
de proteínas en mezclas complejas.
La técnica de cromatografía líquida
acoplada a espectrometría de masas, LC-MALDI-TOF/TOF,
ha sido recientemente implementada en la Unidad de Proteómica
del SCAI gracias a la adquisición del colector de
fracciones para MALDI, SUNCOLLECT, que permite recoger la
separación cromatográfica, de una muestra
compleja de péptidos o proteínas procedente
de un sistema nano-LC, y depositarla en una placa MALDI.
El LC-MALDI-TOF/TOF es una técnica off-line de LC-MS/MS
la cual combina las bondades de la separación de
péptidos o proteínas de un sistema nano-LC
(ULTIMATE-3000, LC Packings) con la sensibilidad y precisión
de masa que nos proporciona el ABI 4800 MALDI-TOF/TOF analyzer
(Applied BioSystems), de reciente incorporación en
nuestra unidad.
Mediante la puesta a punto de esta técnica, la Unidad
de Proteómica pretende “aproximar” la
identificación de proteínas procedentes de
muestras líquidas al espectrómetro de masas
MALDI-TOF/TOF. Hasta ahora, su aplicación sólo
era posible, bien a muestras procedentes de geles mono o
bidimensionales, o bien a muestras líquidas puras.
Asimismo y gracias a esta técnica, se facilita el
análisis de expresión proteínas mediante
técnicas de Proteómica Cuantitativa, como
el marcaje con etiquetas isobáricas para cuantificación
absoluta y relativa (iTRAQ), que posibilita la identificación
y cuantificación de proteínas de distintas
condiciones experimentales, integradas dentro de una misma
muestra o experimento.
Para más información puede acceder al sitio
web de la Unidad de Proteómica en la web del SCAI
(http://www.uco.es/servicios/scai/proteomica.html).
