Estandarización de un protocolo sencillo para la extracción de adn a partir de quesos frescos, semi-curados y curados de cabra

Resumen

El queso es el producto fresco o madurado, sólido o semisólido, obtenido de la leche total o parcialmente desnatada, coagulado total o parcialmente por la acción del cuajo, por un proceso de acidificación o por la adición de una enzima proteolítica (coagulación enzimática). Muchos quesos de cabra se elaboran con leche de una raza determinada y así queda recogido en el pliego de condiciones de las denominaciones de origen, aunque no se dispone de un sistema de trazabilidad genética para verificarlo. La trazabilidad genética se basa en la identificación de los animales y sus productos a través del estudio de secuencias específicas de ADN variables entre los individuos que permiten distinguir entre ellos. El futuro de las razas autóctonas pasa por el reconocimiento y valoración de sus productos. El disponer de un método para verificar la raza productora de la leche utilizada en la elaboración de los quesos sería una importante herramienta para detectar fraudes en estos productos protegidos vinculados a un genotipo determinado. Para realizar la trazabilidad genética es necesario analizar ADN con una suficiente concentración y pureza, pero los métodos de extracción de ADN disponibles hasta el momento producen un bajo rendimiento de ADN. El objetivo del presente estudio fue la estandarización de un método de extracción de ADN, que diera una buena calidad a partir de diferentes maduraciones de quesos de cabra. Se seleccionaron 15 muestras de queso de leche de cabra 100% con diferentes tipos de maduración: 5 quesos frescos, 5 quesos semicurados y 5 quesos curados. En el protocolo de extracción se utiliza un buffer de incubación de Edwards (Tris 10mM, pH = 8; EDTA20mM, 0,5% SDS, NaCl 2mM), 2-Mercaptoethanol-d6, una modificación del buffer de lisis de Tiocianato de Guanidina (NH2C(=NH)NH2 · HSCN) y columna de sílice. Terminado el proceso de extracción, se procede a la cuantificación utilizando 2 µL de ADN extraído, obteniendo la concentración de ADN y las ratios de absorbancia con los parámetros de 260/230 y 260/280. Con el método de extracción de ADN modificado y estandarizado se obtuvieron suficientes concentraciones de ADN, que van de 21,05 a 214,70 ng/µL. Se ha estandarizado un protocolo sencillo y barato para la extracción de ADN genómico a partir de muestras de quesos de cualquier tiempo de maduración que puede ser utilizado en posteriores análisis genómicos.