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Arch. Zootec. 60:  617-624. 2011.    Download 1962
 
STEPWISE VITRIFICATION OF IN VITRO PRODUCED BUFFALO BLASTOCYSTS
CRIOPRESERVACIóN DE BLASTOCISTOS DE BúFALO PRODUCIDOS IN VITRO

Abd-Allah, S.M.1

1Department of Theriogenology. Faculty of Veterinary Medicine. Beni-Suef University. Beni-Suef. Egypt.

Additional keywords
Embryo. Stepwise vitrification. In vitro fertilization.
 
Palabras clave adicionales
Embrión. Vitrificación por etapas. Fertilización in vitro.
 
SUMMARY
The purpose of this study was to evaluate the use of a stepwise vitrification as a method for cryopreservation of in vitro-produced (IVP) buffalo blastocysts and to compare the results with post-thaw survival rate of buffalo blastocysts frozen by stepwise vitrification with those frozen by conventional vitrification (one step method). Selected IVP blastocysts were exposed to a vitrification solution consisting of 40% ethylene glycol (EG) plus 0.3 M trehalose and 20% polyvinyl pyrrolidone (PVP) for 1 min and loaded in 0.25 ml plastic mini straws containing 100 µl of 10% sucrose. The loaded cryostraws were cryopreserved by either the stepwise vitrification or one step vitrification and stored in liquid nitrogen for one month. After thawing and removal of cryopro-tectants, embryos exhibiting intact zona pellucida and uniform blastomeres were considered suitable for in vitro culture. Of the embryos cryopreserved by stepwise and one step vitrification, 100 and 60%, respectively, recovered embryos post-thawing. Similarly 95.4 and 71.1% of embryos cryopreserved by stepwise and one step vitrification were exhibiting good embryos post-thawing. Post-thaw blastocysts were serially washed in tissue culture medium 199 (TCM-199) for 5 min in both cases. They were then cultured in TCM-199 supplemented with 10% fetal calf serum for 24-48 h. Development to hatched blastocyst stage was considered the initial indicator of success of cryopreservation of embryos. The rates of blastocyst re-expansion and hatching of stepwise vitrified blastocysts (66 and 55%, respectively) were significantly higher (p<0.01) than the corresponding values with one step method (40% and 20%, respectively) and it was nearly similar to that of the control group (68% and 58%, respectively). This is the first report on stepwise vitrification of buffalo embryos. Present results suggest that stepwise vitrification supports better in vitro survival of frozen thawed buffalo embryos.
 
RESUMEN
El propósito de este estudio fue evaluar el uso de la vitrificación por etapas como un método para la críopreservacion de blastocistos de búfalo producidos in vitro (IVP) y comparar sus resultados con los de de blastocistos congelados por el método convencional de vitrificación en una etapa. Blastocistos (IVP) seleccionados fueron expuestos a una solución de vitrificación base de 40% de etilenglicol (EG) más trealosa 0,3 M y 20% de polivinil pirrolidona (PBP) durante un minuto y cargada en minipajuelas de plastico de 0,25 ml que contenian 100 ml de sucrosa al 10%. Las criopajuelas cargadas fueron críopreservadas mediante la vitrificación por etapas o por la vitrificación de una etapa y almadenadas en nitrógeno líquido durante un mes. Después de la descongelación y eliminación de los críoprotectores, fueron considerados adecuados para el cultivo in vitro, los embriones que mostraban una zona pellucida intacta y blastómeros uniformes. De los embriones críopreservados, mediante vitrificación por etapas o de un aetapa, el 100 y 60% respectivamente, fueron recuperados después de la descongelación. Del mismo modo, 95,4 y 71,1% de los embriones críopreservados por ambos métodos, exhibieron fueron buenos después de la descongelación. Los blastocistos postdescongelados, fueron lavados de manera seriada con medio de cultivo de tejidos 199 (TCM-199) durante 5 minutos en ambos casos. A continuación, fueron cultivados en TCM-199 suplementado con 10% de suero fetal de ternero durante 24-48 horas. La incubación hasta la etapa de blastocitos, se consideró el indicador inicial de éxito en la críopreservacion de los embriones. Las tasas de re-expansión e incubación de los blastocistos vitrificados por etapas (66 y 55%, respectivamente) fueron mayores (p<0,01) que los valores correspondientes al método de una etapa (40 y 20% respectivamente) y fueron muy parecidos a los del grupo control (68 y 58% respectivamente). Este es la primera comunicación sobre la vitrificación por etapas en búfalos. Los resultados obtenidos sugieren que la vitrificación por etapas favorece mejor la supervivencia in vitro de los embriones de búfalo descongelados.
 
Arch. Zootec. 60:  617-624. 2011.    Download 1962
     
         
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